Mechanizmy opornosci dla inhibitora kinazy tyrozynowej Brutona Ibutynib AD 6

Mutacja C481S w BTK nadaje względną oporność na ibrutinib poprzez zapobieganie nieodwracalnemu wiązaniu, zapewniając potwierdzenie, że jest to funkcjonalnie istotna mutacja oporności. Porównaliśmy fosforylację BTK z ekspozycją na ibrutinib w komórkach uzyskanych w punkcie wyjściowym oraz w momencie nawrotu u jednego z pacjentów, u których rozwinęła się mutacja BTK C481S. Na początku, fosforylacja BTK została całkowicie zniesiona przez ibrutinib z wymywaniem lub ciągłą ekspozycją na ibrutinib. Jednak w czasie nawrotu ibutynib hamował fosforylację BTK tylko przy ciągłej ekspozycji, co pokazuje, że lek wiąże się odwracalnie z mutantem u pacjentów.
Zidentyfikowane mutacje w PLC?2 jako mechanizmy oporności In Vitro i Pacjenci
Charakterystyka funkcjonalna PLC?2 z mutacjami R665W i L845F. Po stymulacji komórek DT40 przeciwciałem anty-IgM, testy przepływu wapnia wykazały uwalnianie wapnia w komórkach z niezmutowanym PLC?2, kt óry może być całkowicie hamowany przez ibrutinib. Komórki zawierające mutację R665W lub mutację L845F wykazały uwalnianie wapnia, które nie jest hamowane przez ?M ibrutinibu (P = 0,62 dla R665W i P = 0,43 dla L845F). Paski błędów reprezentują błędy standardowe. RFU oznacza względne jednostki fluorescencji.
Wykazano, że mutacja S707Y w PLC?2 ma efekt wzmocnienia funkcji w wyniku rozerwania autoinhibicyjnej domeny SH2. Dlatego zdecydowaliśmy się skupić na funkcjonalnej charakterystyce mutacji R665W i L845F. Trwale transfekowaliśmy niezmutowane PLC?2, PLC?2 z mutacją L845F lub PLC?2 z mutacją R665W do komórek HEK 293T i DT40, które nie wykazują ekspresji endogennej PLC?2 (Fig. 7A w Dodatku Uzupełniającym). Przebadaliśmy przepływ wapnia w komórkach DT40 po stymulacji przeciwciałem anty-IgM w obecności niezmutującego lub zmutowanego PLC?2. W przeciwieństwie do BTK z mutacją C481S, dla której strumień wapnia był bardzo słabo hamowany przez i brutinib, PLC?2 z mutacją R665W lub mutacją L845F wykazywał zwiększony strumień wapnia za pośrednictwem IgM, który nie był hamowany przez ibrutinib. Tak więc, te mutacje pozwalają na sygnalizację zależną od receptora komórek B, która jest niezależna od BTK. Podobnie, po stymulacji przeciwciałem anty-IgM, komórki z mutacją R665W lub mutacją L845F w PLC?2 wykazywały mniejsze hamowanie w obecności ibrutinibu niż komórki nie zmutowane, jak zmierzono przez fosforylację ERK i AKT (Fig. 7B w dodatkowym dodatku ). Dane te pokazują, że mutacje R665W i L845F w PLC?2 są potencjalnie mutacjami powodującymi wzrost funkcji w obecności stymulacji receptora komórek B i mogą być istotne jako mutacje nadające oporność na ibrutinib u pacjentów.
Rysunek 3 [hasła pokrewne: chirurgiczne usuwanie ósemek, ortodonta wrocław, dentysta legnica ]

Powiązane tematy z artykułem: chirurgiczne usuwanie ósemek dentysta legnica ortodonta wrocław